重組胰蛋白酶細胞消化液的選擇及在細胞培養液中的應用

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  用不同活性的兩種細胞消化液消化Hela貼壁細胞,觀察消化結果和記錄消化時間及轉接培養后的生長狀態,見表1

細胞消化液

時間/min

消化完全細胞/%

生長狀態

PBS+1kU

7

86

PBS+2kU

6

80

PBS+5kU

4.5

50

不好

PBS+10kU

3

42

不好

PBS+0.01%EDTA+1kU

3

90

PBS+0.01%EDTA+2kU

2

96

PBS+0.01%EDTA+5kU

1.8

35

不好

PBS+0.01%EDTA+10kU

1.5

20

不好

1 不同細胞消化液的細胞消化時間及消化后和轉接培養后的生長狀態

由表1可見,第一組細胞消化液是單獨使用RPT 消化貼壁細胞,在PBS+1KUPBS+2KU組的消化時間很慢(6min以上),且由于時間過長,致使細胞損害,細胞傳代后不能正常生長;隨著RPT活性增加到5kU10kU,消化時間縮短,但細胞毒性增加,所以RPT不能單獨使用。第二組細胞消化液是RPTEDTA配合使用,消化時間縮短,消化后和轉接培養后細胞狀態較好。由于EDTA是化學螯合劑,主要螯合Ca2+Mg2+,使細胞分離,細胞毒性小,能幫助RPT消化細胞。根據消化時間,消化后細胞生存能力和轉接后生長狀態,最終確定活性2KU/mlPBS+0.01%EDTA細胞消化液最合適,見圖1

1 細胞消化前后形態

a. Hela細胞消化前的形態;

b. Hela細胞消化后的形態正常,細胞分離完全(消化時間:2min);

c.轉接培養24h后的生長狀態正常。

 

 

 

 

2019年11月5日 11:17
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