重組Kex2蛋白酶反復凍融穩定性聲明

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一、試劑

供試品:Kex2蛋白酶(凍干粉),批號:Re170601

測活緩沖液:50mM Tris-HCl+2mM CaCl2pH8.0

溶解緩沖液:20mM  NaAc-HAc2mM CaCl2pH 5.2

 

二、儀器設備

TU-1901雙光速紫外可見分光光度計 

SW-CJ-1D型單人凈化工作臺 

 

三、實驗方法 

供試品的配制:取供試品適量,20mM NaAc-HAc2mM CaCl2pH 5.2溶解1mg/ml1mg/ml的供試品溶液20mM NaAc-HAc2mM CaCl2pH 5.28X,稀釋過程中動作輕柔,避免氣泡的產生,所有操作均在超凈臺中進行 

活性測定:對蛋白進行反復凍融后測定活性,進3次重復活性測定  

保存條件:-20以下

 

三、實驗步驟

取光程1cm的帶蓋石英比色杯,加25預熱過3ml 底物溶液,紫外分光光度法操作規405nm的波長處,調零。取供試品溶10.0μl加入,立即計時并搖勻,405nm的波長處測定吸光度值,每20s讀取吸光度,2min 

 

四、蛋白比活計算 

img1

 

五、實驗結果: 

img2

 

六、總結: 

Kex2反復凍3次之后活性開始有所下降,下降到一定程度之后活性開始穩定Kex2反復凍5次之后活性基本穩定,比活符合標準 

 

 

 

2019年11月5日 11:17
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