重組腸激酶在2-8℃條件下14天的穩定性

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一、試劑

試劑A. 25 mM Tris HCl Buffer, pH 8.0 at 25°C (稱取Tris 0.303gr, 溶解在80ml 純化水中, 25°C,用2mol/LHCl 調pH 8.0,加純化水至100ml.)  
試劑B. 重組腸激酶酶液 
2-8°C保溫箱保存的三個批次的重組腸激酶:REK161101 (10U/µl),
REK161002(10U/µl), REK160901(10U/µl).
試劑C. 底物溶液
底物蛋白溶液: 50μg/, 1mg/ml, 儲存在 -80°C.


二、活性測定


用試劑A稀釋REK 溶液至0.1 unit /μl,取1 µl 至底物溶液中50µl (50μg/, 1mg/ml).混勻,25 °C酶切14-16h, SDS-PAGE分析酶切結果。
單位定義:1U定義為在25℃,12h~16h之內,將0.5mg保存于25mM Tris-HCl 8.0 緩沖液中的融合蛋白切割95%所需的酶量。


三、操作步驟


穩定性研究:將重組腸激酶溶液儲存在密封避光2 - 8℃冰箱中,分別在第1,3,5,714天時測定酶活性; 取三批次的平均值作為檢測結果。


四、結果


結果如圖1和圖2所示:
重組腸激酶溶液在密封避光2 - 8℃冰箱中保存14天后,穩定無活性損失。


1重組腸激酶在2 - 8℃14天內的活性變化曲線
活性是在第1,3,5,714天時測定,結果為三批次的平均值

圖2 重組腸激酶在2 - 8℃下第14天時的SDS-PAGE活性分析
Lane 1, 底物; Lane2, 批次:REK161101 ; Lane 3, 批次:REK161002;
Lane 4, 批次:REK160901.

 

 

 
 

  

2019年11月5日 11:17
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