雅心重組抑肽酶(RTI16)與sigma提取抑肽酶(A1153)比較

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一、實驗目的

比較雅心重組抑肽酶(貨號RTI16,批號:RTI161101)與sigma抑肽酶(貨號A1153, 批號:SLBP2656V )在比活性、吸光度、酸度、純度等方面的異同。

二、實驗方法

1蛋白含量、比活性、吸光度測定,酸度檢測

稱取一定量的兩種酶的粉末,分別用純水溶解,配制成2.5mg/ml的酶液 ,按照吸光系數法測定蛋白含量,其中A280nm,1cm(1mg/ml)=0.84,活性測定按照SOP操作,計算比活性。將酶液稀釋成3EPU/ml,277nm下測定吸光度,要求不大于0.8。測定酶液的酸度。

2HPLC純度測定

①選擇分子篩分析柱為TSK-GEL G2000SWXL

②該柱子的pH范圍為2.5-7.5,速度范圍為0.5-1.0ml/min(最高可為1.2),溫度范圍10-30℃,洗脫液鹽濃度小于0.5M

③檢測波長280nm

④根據以上兩點設計方法如下表:

方法

pH

流速ml/min

溫度℃

分子篩

5.8

1

25

⑤其他方法按照液相SOP進行操作

⑥上樣量均是20ug

⑦樣品處理:純水溶解凍干粉

三、實驗結果

1、蛋白含量、比活性、吸光度和酸度

 

蛋白含量

比活性EPU/mg

吸光度

酸度pH

雅心RTI

72%

3.71

0.505

5.0-7.0

Sigma抑肽酶

76.9%

3.56

0.526

5.0-7.0

2、HPLC純度

①雅心重組抑肽酶(RTI161101)

②sigma提取抑肽酶(貨號A1153,lot number:SLBP2656V)

 

四、實驗結論

1.兩種蛋白在蛋白含量、比活性、吸光度和酸度方面都基本一致,其中雅心重組抑肽酶(RTI161101)比活性略高于sigma抑肽酶(A1153)。

2.HPLC純度:雅心重組抑肽酶(RTI161101)比sigma抑肽酶(A1153)峰形更集中,兩者純度均為100%。

 

 

 

 

2019年11月5日 11:17
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