胰蛋白酶細胞消化液的活性測定和抑肽酶對胰蛋白酶的抑制

首頁    技術支持    胰蛋白酶細胞消化液的活性測定和抑肽酶對胰蛋白酶的抑制

 

一、實驗目的

1.測定sigma公司的trypsin-EDTA細胞消化液的活性。

2.用重組抑肽酶抑制trypsin-EDTA細胞消化液中trypsin活性達完全所需的抑肽酶的量。

 

二、實驗材料

1) Trypsin-EDTA solution , sigma T4049-100ml  Lot # SLBN6048V  EXP Aug 17, 0.25%, sterile filtered,BioReagent, suitable for cell culture, 2.5g porcine trypsin and 0.2g EDTA per liter ofHank’s Balanced Salt Solution with phenol red.

2) RTI (recombinant aprotinin) Lot # 160301 ,  5.8 EPU/mg, 21.9mg/ml

3) 活性測定底物:BAEE溶液,按照公司標準方法配置。

4) 胰蛋白酶活性測定方法,按照公司標準方法操作。

 

三、實驗過程及結果

1) 測定trypsin-EDTA solution的活性:4150 BAEE unit/ml,

2) 按照1EPU RTI可抑制16200 BAEE unit的胰蛋白酶活性,

計算完全抑制4150 BAEE unit/ml胰蛋白酶的RTI用量為 4150/16200=0.256 EPU

 

四、具體實驗如下

2.1. 150ul trypsin-EDTA solution,總活性為622.5 BAEE unit (4150 BAEE unit/ml * 0.15)

2.2. 計算完全抑制,所需加入RTI的體積,622.5/16200=0.0384 EPU,換算為體積為:0.0384/(5.8*21.9)=0.302ul,將RTI稀釋10倍后,加入量為3.02 ul

反應5min后,測定胰蛋白酶活性。

無活性。

結論:完全抑制

2.3. 計算50%抑制所需的加入量為1.51ul 其他操作同2.2

反應5min后,測定胰蛋白酶活性。

測定活性:2100BAEE unit/ml

結論:抑制率為49.39%

 

五、結論

11EPU RTI可完全抑制16200 BAEE unit的胰蛋白酶活性,若不完全抑制,則抑制率與加入的RTI的量成正比。

2)按照胰蛋白酶活性加入RTI (aprotinin)的量。

3Trypsin-EDTA solution , sigma T4049-100ml  Lot # SLBN6048V的活性為4150 BAEE/ml

若達到完全抑制,每ml中加入aprotinin的量為0.256 EPU

加入一半量的aprotinin,可抑制一半的胰蛋白酶活性。

 

 

 

  

2019年11月5日 11:17
?瀏覽量:0
?收藏