重組腸激酶和目的蛋白分離純化推薦方案

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       重組腸激酶專為切割重組表達融合蛋白設計,分為兩個類型:rEK-B rEK-H ,分別為不含有His-6和含有His-6 重組標簽。

       雅心生物目前生產的為rEK-B.不含His標簽,相對比活高,約為20000 Unit/mg pro,按照活性定義,1 Unit 可以切割0.5mg目的蛋白,則酶切液中的重組腸激酶相對于目的蛋白的含量為萬分之一(0.01%)。所以,在進一步的實驗中,可以不考慮其對下游實驗的影響,建議可以不純化。

     

 如果確實需要去除rEK,建議的去除方法如下:

       如果使用親和層析,可以利用胰蛋白酶抑制劑親和膠,由于腸激酶是一種絲氨酸蛋白酶,胰蛋白酶抑制劑可以與腸激酶結合,從而達到純化目的。建議利用離子交換層析分離去除微量的腸激酶。

       PH8.0條件下,腸激酶與DEAE膠結合,并且在0.15M NaCl中可以被洗脫。可以利用目的蛋白與腸激酶電荷以及與DEAE膠的結合以及洗脫的不同條件將二者進行分離。

 

 
2019年11月5日 11:17
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