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序列分析純V8蛋白酶

V8蛋白酶 V813

CAS:66676-43-5  EC:3.4.21.19

 

V8蛋白酶|產品簡介

 

酶切位點:V8蛋白酶屬于絲氨酸蛋白酶家族,能特異水解谷氨酸(Glutamic acid、E)或天冬氨酸(Aspartic acid、D)殘基羧基側肽鍵。在pH 7.8的NH4HCO3和pH 4.0的CH3COONH4緩沖液中識別并切割Glu羧基端肽鍵,在pH 7.8的磷酸鹽緩沖液中識別并切割Glu或Asp羧基端肽鍵,且對Glu的水解速率高于Asp。

產品應用在進行蛋白質酶切測序、肽圖譜分析和肽質量指紋圖譜分析中使用時,可以單獨使用或與其他蛋白酶混合使用。

基本特性:V8蛋白酶在pH4.0-10.0之間均有活性,最適pH為8.0-8.5。V8蛋白酶的抑制劑有二異丙基氟磷酸(DFP)、α2-巨球蛋白和Nα-P-甲苯磺酰基-L-賴氨酸氯甲基酮(TLCK)。

 

V8蛋白酶|產品特性

 

來源

                重組大腸桿菌

產品外觀

白色、類白色、類黃色粉末

比活

≥ 5.0 U /mg pro.

蛋白電泳

單一主條帶

分子量(蛋白電泳)

24.0±2.4 kDa

備注在25℃,pH7.8的條件下,每分鐘催化底物(Z-Phe-Leu-Glu-4-nitranilide)生成1μmol對硝基苯胺(4-nitroaniline)所需要的酶量為一個酶活性單位。

 

V8蛋白酶|使用方法

 

使用前注意:可按使用量分裝以最大限度避免污染或自切。
目的蛋白溶解:用酶切buffer溶解目的蛋白,例如25-50 mM NH4HCO3  pH 7.8,若溶解度不好對目的蛋白變性,添加尿素、SDS、DTT或加熱。尿素和SDS對V8蛋白酶的影響見表一。

酶切:V8蛋白酶和目的蛋白推薦比例為1/20-1/100(W/W),25℃或37℃酶切2-18h。
 
表一:V8蛋白酶在含有不同濃度變性劑,尿素25℃2h,SDS25℃12h的穩定性
(注:V8蛋白酶0.5mg/ml,50mM Tris-HCl pH8.0)

 

應用舉例:重組V8酶切胰島素
   100 μl胰島素溶液+198 μl 0.4 M Tris-HCl pH 8.0+60 μl 0.1%V8蛋白酶液+超純水補至400 μl。37 ℃水浴反應2 h,加6 μl磷酸溶液終止反應,C18柱分析:

A:酶切之前

     IMG_256

B:酶切之后

          IMG_257

 

V8蛋白酶|儲存運輸


儲存穩定性:重組V8蛋白酶凍干粉存于2-8℃,24個月穩定;

溶解后穩定性:用水或50 mM Tris-HCl pH 8.0溶解以后存于-20℃ 以下(1mg/ml),6個月穩定;用水或50 mM Tris-HCl pH 8.0溶解以后存于4℃(1mg/ml,無菌),2個月穩定;用50 mM Tris-HCl pH 8.0溶解以后存于25℃或37℃(0.5mg/ml)12h,活性可維持85%以上;溶解后溶液可反復凍融10次無活性損失。

運輸穩定性:藍冰保溫運輸,活性穩定。

 

V8蛋白酶|產品優勢

 

序列分析純胰蛋白酶:特異性高,穩定性好。
無動物源性:重組生產,無外源性的病毒污染,生產過程不使用任何動物源原料。

質量穩定:批量生產,可保證穩定連續的批次生產;產品批次間無差異,質量穩定。

純度高:比活高;宿主蛋白殘留小于生物制品限度要求。

凍干粉:易于儲存和運輸。

符合法規要求:生產設備和生產環境符合相關法規要求,生產過程完全遵循NSF ISO 9001:2015質量體系并符合GMP指導原則。

質量文件完整:按客戶需求,可提供相關法規支持文件。


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  • 產品規格
    50ug;100ug;1mg;2mg
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