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重組腸激酶

重組腸激酶 REK08

CAS:9017-74-8  EC:3.4.21.9

 

【重組腸激酶產品簡介

 

酶切位點:腸激酶可以切割含有四個天冬氨酸的賴氨酸羧基端肽鍵:天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 賴氨酸(DDDDK)。

氨基酸序列:雅心重組牛腸激酶是一種高純度的重組牛腸激酶輕鏈片段氨基酸序列與牛腸激酶輕鏈一致

酶學性質:腸激酶可去除位于蛋白質N-末端的融合蛋白,以除去不需要的融合標簽。

基本特性:該酶經HPLC純化,純度高,特異性高,不含其他蛋白酶可以在較寬pH范圍(4.5-9.5)和較寬溫度范圍內有效切割融合蛋白。

 

【重組腸激酶|產品特性

 

來源

                重組大腸桿菌

產品外觀

澄清、無色至淡黃色液體

活性

≥ 5.0 U/µl

純度(蛋白電泳)

單一主條帶

分子量(蛋白電泳)

25.8 ±2.6kDa

備注1U定義為在25℃,12h~16h之內,將0.5mg保存于25mM Tris-HCl 8.0 緩沖液中的融合蛋白切割95%所需的酶量。

 

重組腸激酶|使用方法

25℃酶切條件:

反應體系:

29415828

反應條件:25℃過夜酶切,或完全酶切需16-24h,用SDS-PAGE檢測酶切效果。

結果驗證:使用0.1 U本品酶切50 ug融合蛋白底物,反應溫度是25℃,酶切不同時間梯度(8 h,16 h,24 h,40 h,48 h,64 h)

IMG_256

 

4℃低溫酶切條件:4℃能對底物進行有效酶切,但需要將酶切時間延長至 48-64h,或增加 2-3 倍酶量。

酶切結果驗證:使用0.1 U本品酶切50 ug融合蛋白底物,反應溫度是4℃,酶切不同時間梯度(8 h,16 h,24 h,40 h,48 h,64 h)

IMG_256

酶切優化和放大:

優化:可以對酶切條件進行優化,例如緩沖液 pH,融合蛋白濃度,EK的量,以及酶切時間,使融合蛋白能在穩定條件下被酶切,用 SDS-PAGE 檢測酶切效果。

放大:選擇優化后的反應條件,按該條件等比例放大,用 SDS-PAGE 檢測酶切效果。

去除重組腸激酶的方法:使用胰蛋白酶抑制劑親和層析(例如 sigma T0637)去除重組腸激酶。

 

重組腸激酶|儲存運輸


儲存穩定性:-20℃,12個月穩定;25℃,一周內,無活性損失。緩沖體系:50mM Tris-HCl,pH8.0,250 mM NaCl,2 mM Ca 2+,50%甘油。反復凍融5次,無活性損失。

運輸穩定性:藍冰保溫運輸,活性穩定。

 

重組腸激酶|產品優勢

 

特異性特定的蛋白酶,切割前面含有四個天冬氨酸的賴氨酸羧基端位點:天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-賴氨酸(DDDDK)。
無動物源性:重組生產,無外源性的病毒污染,生產過程不使用任何動物源原料。

質量穩定:批量生產,可保證穩定連續的批次生產;產品批次間無差異,質量穩定。

純度高:不含其他蛋白酶,無非特異性切割。

符合法規要求:生產設備和生產環境符合相關法規要求,生產過程完全遵循NSF ISO 9001:2015質量體系并符合GMP指導原則。

質量文件完整:按客戶需求,可提供相關法規支持文件。


重組腸激酶|注意事項

 

酶切溫度:不建議37℃條件下酶切,可能會有非特異性酶切出現。

酶切條件:在>200mM 咪唑,或>200mMNaCl,或>5%甘油條件下,酶切效果受影響,可參照以下推薦方法進行酶切:

 

推薦方法:為獲得理想酶切結果,請將樣品透析到25mM Tris-HCl 8.0緩沖液中,再進行酶切。若不便透析,可將樣品稀釋咪唑含量在100mM以下,NaCl濃度在50mM以下,甘油濃度小于5%以下進行酶切,酶的用量與蛋白的比例不變(即1U酶切500µg蛋白)。

如果樣品溶液中含有上述成分中的一種或多種,且不便去除,此時適當增加酶量或延長酶切時間,也可達到較好酶切效果。

磷酸鹽的影響:磷酸鹽對Enterokinase有很強的抑制作用,痕量的磷酸鹽都會嚴重影響Enterokinase的活性,因此在酶切體系內不能存在磷酸鹽。

去除腸激酶:本品是具有高酶活力重組腸激酶,切割蛋白使用量少,可不考慮除去。后續如需去除重組腸激酶,可用陰離子交換樹脂(eg.DEAE-FF)對其進行洗脫。推薦洗脫條件如下:

平衡緩沖液:25 mM Tris-HCl pH 8.0

洗脫緩沖液:25 mM Tris-HCl pH 8.0,含100 mM NaCl

酶切效果:蛋白酶切效果不好,可適當增加酶量,或適當延長酶切時間。

 

重組腸激酶|相關產品

 

重組羧肽酶B;序列分析純胰蛋白酶;重組人胰蛋白酶;重組抑肽酶。

 

 

 

 

  • 產品規格
    100U;500U;1000U;10KU;100KU;1MU
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